一、流动相的pH应在使用范围内
以硅胶为基质的反相色谱柱的pH范围为2~9,流动相超过其pH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂,使柱效下降,寿命变短。
二、去除样品和流动相汇总的固体颗粒
样品和流动相中含有固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板,不仅会引起柱压的升高,而且也会引起柱效下降。因此,建议使用超纯水和色谱纯试剂,在分析前对样品进行针筒过滤,流动相过0.45um滤膜。
三、使用保护柱或在线过滤器
保护柱和在线过滤器上都有筛板,其孔径与色谱柱筛板孔径相同,因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱,有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱压升高在分析故障中占很大比例,因此除对样品和流动相进行过滤外,建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
四、正确使用缓冲盐
缓冲盐使用不当会使其在流动相(含有机溶剂)中析出,堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升;同时阻碍了基质上的键合的碳链自由舒展,使用色谱柱的保留能力下降,柱效降低。
建议使用前要过滤,使用后要冲洗。具体方法如下:
1、等度条件:使用缓冲盐前和使用后需要过滤流动相1.0ml/min流速冲洗60min.
2、梯度条件:用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前,用与初始流动相组成相同的过滤流动相似1.0ml/min流速冲洗60min;分析完成后,再用该过滤流动以1.0ml/min冲洗色谱柱120min。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓,以避免梯度过程中缓冲盐析出。
五、柱清洗方法:
1、未使用缓冲盐:每天分析完成后,用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱60min。
2、使用过缓冲盐:分析完成后,先后用上述方法除去缓冲盐,然后再用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱60min。