气相色谱-串联质谱法测定血液中乙基葡萄糖醛酸苷

目的 ：建立血液中乙基葡萄糖醛酸苷（ethyl glucuronide，EtG）的气相色谱-串联质谱（GC-MS/MS）测定方法。

方法 血液用于乙腈沉淀蛋白，离心后，将上清液转移吹干，残留物经N,O-双（*基硅烷基）三氟乙酰胺衍生化，用GC-MS/MS进行检测。结果 血液中EtG的检出限为0.05ul/ml，线性范围为0.1-10ul/ml（r=0.9999）。对送检案例血液检材进行EtG检测，效果良好。

结论 本方法适用于血液中EtG的检测。

关键词：法医毒理学；血液；乙基葡萄糖醛酸苷；气相色谱仪-串联质谱法

酒后驾车是一个世界性的交通安全问题。我国每年因交通事故死亡中约25%-30%与酒后驾车有关。由于乙醇在体内代谢较快，一般饮酒后6-8h体内已检测不到乙醇。对于疑酒后驾车肇事后逃逸者，在一定时间后体内检测不到乙醇，因此需要寻找新的途径证明肇事者是否为酒后驾车。

乙醇进入人体后，有一部分乙醇与尿嘧啶核苷-5‵-二磷-葡萄糖醛酸结合成乙基葡萄糖醛酸苷（ethyl glucuronide，EtG）由于其比原体乙醇的半衰期长，当血液中乙醇浓度低于检测*，体内仍可在一定时间内检出EtG。因此血液中EtG的检测及评价越来越为人们所重视 ，特别是酒后驾车肇事逃逸案件中，抽血与事故发生时间隔过长，血液中往往测不出乙醇成分，但可以检测血液中EtG^。

血液中EtG的测定方法主要有液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）和气相色谱-质谱联用发（GC-MS）。LC-MS/MS是zui常用的检测方法。GC-MS测定中杂质干扰较多，对样品前处理要求较高，需要固相萃取，样品处理时间长，而气相色谱-串联质谱法（GC-MS/MS）可以克服这些缺点。

本研究建立了血液用乙腈沉淀蛋白，经衍生化后用GC-MS/MS检测EtG的方法

1 材料与方法：

   1.1 仪器与试剂

           气相色谱（美国Agilent公司）与串联质谱（美国Waters公司）联用仪，离心机（美国Eppendorf公司），EtG和EtG-d₅（美国Cerilliant公司），N,O-双（*基硅烷基）三氟乙酰胺-*基氯硅烷（BSTFA-TMCS,体积比为99：1）（美国Sigma-Aldrich公司），其余试剂均为分析纯。

1.2溶液配制

         EtG溶液：将100ug/ml的EtG标准甲醇溶液用甲醇稀释得20.0ug/ml的EtG工作液。 内标EtG-d5工作液。

1.3样品前处理：

取血液0.10ml置于1.5ml离心管中，加入5ul内标EtG-d₅工作液和0.90ml乙腈，涡旋混合，以离子半径6cm，10000r/min，离心5min，转移上清液另一离心管中，6cm，10000r/min，离心5min，转移上清液另一离心管中，60℃水浴中空气流下吹干，残留物中加入BSTFA-TMCS（66ul）和吡啶（33ul），90℃干燥箱中进行衍生化反应30min，取出。冷却后1ul进样。

1.4仪器分析：

1.4.1气相色谱柱条件

         色谱柱：HP-1MS毛细管柱（30mX0.25mm,0.1um）。柱温：初温100℃保持1min，以8℃/min程序升温205℃，再以30℃/min程序升温280℃保持3min。进样口温度： 250℃。分流比为10：1.载气：氦气，流速为1ml/min。

1.4.2质谱条件

离子源（EI源）温度220℃，接口温度300℃，碰撞气为氩气。正离子多反应监测模式检测，MRM定性离子对：EtG 为261>143（CE=5）,261>73（CE=20）;EtG-d₅为266>143（CE=5）,266>73（CE=20）;以261>143（EtG）和266>143（EtG-d₅）作为定量离子对。

2  案例应用：

   某司机于某日上午7：00许发生交通事故后，驾车逃离现场，当日晚21：00许投案。静脉抽血送检，其时距交通肇事时间为14h，结果未检出乙醇成分。应用本方法分析，结果检出EtG成分，为委托单位办案提供了有力的证据。

3   结论

        本方法建立了一种有机溶剂沉淀蛋白，经衍生化后，用GC-MS/MS检测血液中EtG的方法，并成功应用于案例。该方法简便、快速，适用于实际检案工作。